一般来说,灯越亮,光解步骤的效率就越高.非LED灯(如卤素灯)可能会加热您的样本并对分析产生负面影响,照射时需要使用冰块对样品降温处理!样本可以在光解后冷冻保存!若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本,建议先进行预实验!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA;因此,在提取基因组DNA时,需使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理!
上海晅科生物科技有限公司是一家专注生物诊断试剂的企业,在PMA(叠氮溴化丙锭)标准液领域深耕十几年,对于PMA标准液,有着敏锐的市场嗅觉,丰富的优化经验,扎实的技术团队。秉承互利互惠,合作双赢的理念,坚持客户至上,信誉的原则。致力于从多渠道,多方位,多平台为客户提供的PMA(叠氮溴化丙锭)标准液服务,并受到了客户的一致好评。
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将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,照射时间需自行摸索!例如,可用60W的蓝光灯,照射15min!注:①若使用卤素灯,我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上。冰块应放在透明托盘中,调整光源使其直接指向样品,光解5-15min;②若直接用环境中获取的细菌进行实验,由于环境样本的复杂性或浑浊度,需适当延长光解时间。注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验!试剂盒组分中含有荧光染料,使用及保存过程中注意避光.
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图PMA修饰DNA后通过qPCR定量活菌和死菌的原理使用方法使用前注意事项PMA根据细胞膜通透性区分死菌和活菌。许多杀死细菌的方法,会导致细胞膜受损,因此适用于PMA检测.但有些方法,如紫外线照射,可能不会立即导致细胞膜破裂!因此,在选择PMA检测之前,需先进行文献检索和预实验确定是否适用于您选择的细菌类型和杀伤方法。PMA处理完细菌后需要进行光解,以使染料与死细胞DNA共价结合!光解操作可以使用蓝色或白色光源!
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建议开始PMAqPCR活细菌检测前,先验证引物及PCR程序是否合适!死、活细菌对照dCt计算qPCR结束后,使用仪器软件计算每个样本的Ct值!通过计算每个对照细菌的dCt的方式,判断PMA是否成功抑制了死细菌DNA的扩增,计算如下:dCt活=Ct(活,PMA处理)-Ct(活,PMA未处理)dCt死=Ct(死,PMA处理)-Ct(死,PMA未处理)活细菌的dCt期望值接近于0±1,这表明PMA不会影响活细胞DNA的扩增;死细菌的dCt期望值大于4(dCt为4表示减少了约16倍,即去除了94%的死细菌DNA;dCt为8表示减少了约250倍,即去除了96%的死细菌DNA).
取活细菌两份,每份400μL,置于干净离心管中.(建议)制备死细菌.若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌!死细菌的后续操作同活细菌。两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献)。将PMA处理的样本室温置于摇床上,避光孵育10min,使染料与样本充分混匀!
上海晅科生物科技有限公司坐落于上海市奉贤区金海公路3265号14幢11545室,是上海上海奉贤区知名企业,公司业务联系人华:13671826025, 期待您的来电咨询更多关于PMA标准液相关信息! 大功率激光器是工业激光设备的核心部件,近几年来我国在这一领域的技术、工艺水平有了长足的进步,但与美、日、欧盟等发达国家相比我国的大功率激光器的制造水平和应用规模还有很大差距,大量高端大功率激光器件与激光加工成套设备依赖进口,其中一个重要原因是我国的大功率激光器仍然属于研制或小规模生产,没有实现产品标准化,难以提高产品的档次和质量,也限制了产品的发展规模。国家标准大功率激光器应用分技术委员会的成立,将改变这一现状。下一步,委员会将在对国内和国际大功率激光器应用加工设备相关标准进行对比、分析的基础上,编制大功率激光器应用分技术委员会标准体系框架,制订本专业激光器应用和安全辐射等基础标准。