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纯度:应用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析产品纯度!生物活性:进行相应的体外(invitro)或体内(invivo)活性检测!蛋白含量:通过紫外光谱分析,SDS-PAGE电泳检测;必要时应用HPLC定量标准蛋白溶液!内毒素:kineticLAL法检测内毒素。微生物:重组蛋白在装瓶之前都经过滤除菌处理。重组细胞因子的状态:市场上主流的重组蛋白产品,多在不含载体蛋白或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等)的条件下,以低盐的形式做冻干处理,因此微量(多以微克计量)的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,形成很薄或不可见的蛋白层,所以建议在收到试剂后,务必于开盖前先离心20-30秒,使可能附于管盖或管壁的蛋白成分聚集于冻干馆的底部(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)!
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这样一大类因子已发现的有上百种,统称为细胞因子,包括淋巴细胞产生的淋巴因子、单核细胞产生的单核因子、各种生长因子等.许多细胞因子是根据它们的功能命名的,如白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、集落刺激因子(CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、红细胞生成素(EPO)等!重组细胞因子要求:真实性:重组蛋白产品一致经过N末端氨基酸序列分析;必要时应用SDS-PAGE,RP-HPLC和质谱(MS)检测其真实性.
根据产生细胞因子的细胞种类不同分类细胞因子淋巴因子(lymphokine)于命名,主要由淋巴细胞产生,包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等.重要的淋巴因子有IL-IL-IL-IL-IL-IL-IL-10、IL-1IL-1IL-1IFN-γ、TNF-β、GM-CSF和神经白细胞素等。单核因子(monokine)主要由单核细胞或巨噬细胞产生,如IL-IL-IL-TNF-α、G-CSF和M-CSF等!非淋巴细胞、非单核-巨噬细胞产生的细胞因子主要由骨髓和胸腺中的基质细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞产生,如EPO、IL-IL-1SCF、内皮细胞源性IL-8和IFN-β等.
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细胞因子肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)初发现这种物质能造成肿瘤组织坏死而得名!根据其产生来源和结构不同,可分为TNF-α和TNF-β两类,前者由单核-巨噬细胞产生,后者由活化T细胞产生,又名淋巴毒素(lymphotoxin,LT)。两类TNF基本的生物学活性相似,除具有杀伤肿瘤细胞外,还有免疫调节、参与发热和炎症的发生!大剂量TNF-α可引起恶液质,因而TNF-α又称恶液质素(cachectin).
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由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质!细胞因子一般通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应,调控免疫应答!细胞因子(cytokine,CK)是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质,具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等多种功能.
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