注:①商用DNA提取试剂盒提取的DNA,qPCR模板以2μL作为起始优化体积;②模板体积不得超过最终反应体积的10%;③模板浓度:gDNA做模板时,通常1-10ng即可;④PCR引物的终浓度通常为0.4μM,可以得到较好的结果,反应性能较差时,可以在0.2-1μM范围内调整引物浓度。1.轻轻涡旋混匀反应混合液,转移固定体积至PCR管。2.测试程序(根据自备qPCRMix试剂盒程序进行程序设定)。3.数据分析使用活细菌和死细菌作为对照,分析计算样本中活细胞数。建议开始PMAqPCR活细菌检测前,先验证引物及PCR程序是否合适。死、活细菌对照dCt计算(1)qPCR结束后,使用仪器软件计算每个样本的Ct值。(2)通过计算每个对照细菌的dCt的方式,判断PMA是否成功抑制了死细菌DNA的扩增,计算如下:dCt活=Ct(活,PMA处理)-Ct(活,PMA未处理)dCt死=Ct(死,PMA处理)-Ct(死,PMA未处理)(3)活细菌的dCt期望值接近于0±1,这表明PMA不会影响活细胞DNA的扩增;(4)死细菌的dCt期望值大于4(dCt为4表示减少了约16倍,即去除了94%的死细菌DNA;dCt为8表示减少了约250倍,即去除了99.6%的死细菌DNA)。YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(橙红色荧光)YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(橙红色荧光)YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(橙红色荧光)YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(橙红色荧光)YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(红色荧光)YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(红色荧光)YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(红色荧光)YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(红色荧光)YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(远红荧光)YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(远红荧光)YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(远红荧光)YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒(远红荧光)EDU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)EDU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)EDU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)CFDASE细胞增殖与示踪检测试剂盒CFDASE细胞增殖与示踪检测试剂盒DiO(细胞膜绿色荧光探针)DiA(细胞膜绿色荧光探针)DiI(细胞膜橙红色荧光探针)
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