【注意事项】所有操作严格按照说明书进行;试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;反应液应避光保存;反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理!【参考文献】[1]刘炬,徐俊杰,陈薇。
2结果判断阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;可疑:检测通道35Ct值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35Ct值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;阴性:样本检测结果Ct值38或无Ct值!质控标准阴性质控品:Ct38或无Ct值显示;阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;以上条件应同时满足,否则实验视为无效!检测方法的局限性样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段!
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本试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌,用于炭疽杆菌感染的辅助诊断!本试剂对炭疽杆菌特异性基因设计引物和荧光探针[2-3],用荧光PCR技术对炭疽杆菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断.【注意事项】所有操作严格按照说明书进行;试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;反应液应避光保存;反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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2结果判断阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;可疑:检测通道35Ct值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35Ct值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;阴性:样本检测结果Ct值38或无Ct值!质控标准阴性质控品:Ct38或无Ct值显示;阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;以上条件应同时满足,否则实验视为无效。检测方法的局限性样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段.
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【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融.【使用方法】样品处理(样本处理区)2DNA提取推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作!试剂配制(试剂准备区)根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满10份,多配制1份)将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21uL/管.
【检验原理】本试剂对炭疽杆菌特异性基因设计引物和荧光探针[2-3],用荧光PCR技术对炭疽杆菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断.注:1)不同批号试剂不能混用。2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数!【储存条件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融数不超过5次,有效期12个月!【适用仪器】ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
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炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)炭疽是由炭疽杆菌(BacillusAnthracis,BA)感染引起的一种共患病.BA在极端环境中形成芽孢,可长期、稳定地存在于自然界中!由于BA的稳定性及其致病性,易引发突发公共卫生事件!目前的BA检测方法主要基于病原体的培养、染色镜检、血清学检测等,但这些方法均不适合早期的快速侦检.基于核酸检测的荧光-PCR技术,因其灵敏度高、操作简单、特异性好,可快速检测炭疽病原,及时控制炭疽疫情[1]!
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