14℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h，激酶活性分析建议用2h室温孵育。1加入100ulProteinA琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h，如果所用抗体为鼠抗或鸡抗，建议加2ul"过渡抗体"（兔抗鼠IgG，兔抗鸡IgG）.114000rpm瞬时离心5s，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的RIPAbuffer洗3遍，800ul/遍，RIPAbuffer有时候会破坏琼脂糖珠-抗原抗体复合物内部的结合，可以使用PBS！

　　目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的proreinA就能吸附抗原达到精制的目的!这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。试剂准备预冷PBS，RIPABuffer，细胞刮子（用保鲜膜包好后，埋冰下），离心机！用预冷的PBS洗涤细胞两次，一次吸干PBS。加入预冷的RIPABuffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶，0.

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　　于4°C，12,000rpm离心15s，小心将上清吸取弃之。加入约40µl2倍上样缓冲液，100°C变性5min，稍离心，取适量体积进行Westernblot实验，分别用商品化FLAG标签抗体和蛋白质Y抗体进行检测。通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10cm培养板上的适宜细胞!刮去每块板上的细胞到1ml冰冷的EBC裂解缓冲液中；2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃离心15；3．收集上清（约30ml）并加入30ug的适当抗体，4℃摇动免疫沉淀物1h；4．加入0！

长春Co-IP实验

　　加入20倍体积预冷的TBS缓冲液以平衡Gel，于4°C，4,000rpm离心1min，小心将上清吸取弃之；重复3次！于4°C，12,000rpm离心15s，小心将上清吸取弃之。取蛋白质加入到已平衡化的Anti-FLAGM2AffinityGel中，于4°C孵育。洗脱Gel!于4°C，4,000rpm离心1min，小心将上清吸取弃之。加入1,500µl预冷的IP缓冲液洗脱Gel，于4°C孵育5min，4,000rpm离心1min，小心将上清吸取弃之；如此重复3次。

　　1用60ul2x上样缓冲液将琼脂糖珠-抗原抗体复合物悬起，轻轻混匀，缓冲液的量依据上样多少的需要而定（60ul足够上三道）！1将上样样品煮5min，以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃，留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性.免疫共沉淀反应1．转染后24-48h可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C，离心30min后取上清；2．取少量裂解液以备Westernblot分析，剩余裂解液加1ug相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；3．取10ulproteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3000rpm离心3min；．将预处理过的10ulproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连；5．免疫沉淀反应后，在4°C以3000rpm速度离心3min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次；加入15ul的2xSDS上样缓冲液，沸水煮5分钟；6．SDS-PAGE，Westernblotting或质谱仪分析.　　在列入此次监督抽查计划的20家生产企业中，实际抽到18家压力变送器企业生产的18个批次的产品，抽到率90%。未抽到样品的2家企业生产许可证过期不再生产。从检验结果来看，17批次的产品综合判定为合格，1批次不合格，合格率为94%。经检验不合格的项目为示值误差项，反映出该企业缺乏对整体流程的监管和产品质量管理意识淡薄。抽查中还发现，在抽查到的18家企业中，1家为外资企业，17家为国内企业，外资企业的产品准确度等级远高于国内企业的产品