本试剂用于检测猪血清中猪乙脑病毒抗体,可用于猪乙脑病毒疫苗免疫效果评价!【原理】本试剂盒系由预包被猪乙型脑炎病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪乙型脑炎病毒抗体.实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪乙型脑炎病毒抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪乙型脑炎病毒抗体!
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取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存!空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl.混匀,置37℃反应30分钟.扣去孔内液体,每孔加350ul工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外).置37℃反应30分钟.洗涤,同步骤5。每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
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【注意事项】实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗!酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解!洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净!用于检测的样品应保持新鲜!试验结果的判定必须以酶标仪读数为准!
扣去孔内液体,每孔加350ul工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干!每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)!置37℃反应30分钟.洗涤,同步骤5。每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值),无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值).【参考值】实验正常的情况下,阴性对照≤0。
乙脑抗体ELISA
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【储存及有效期】于2~8℃避光保存,有效期为12个月.包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮!使用期限为2个月。【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。【样品准备】取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染!样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存!用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。