加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)!加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干!
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使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中白介素1β(IL-1β)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素1β(IL-1β)水平!用纯化的小鼠白介素1β(IL-1β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β(IL-1β),再与HRP标记的白介素1β(IL-1β)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色!TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色!
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注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔!如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)!
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染!6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准!8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理!9.本试剂不同批号组分不得混用!保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃!2.有效期:6个月大鼠叶酸(FA)ELISA试剂盒大鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒大鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒大鼠颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒大鼠末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISA试剂盒大鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒大鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA试剂盒操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度!
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加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同洗涤:操作同显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟!终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).10。测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值).测定应在加终止液后15分钟以内进行。小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1.操作失误。例如加错液体,必须从头到尾仔细检查,包括试剂。如果有对照可以排除这个原因。
2.试剂失效
3.实验设计不合理
4.样品处理不合理
5.ELISA实验本身存在的交叉反应、特异性问题
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原因很多,如果详细说明实验,可以给你更多详细解答。