根据使用材料的不同进行下列操作:a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入0!8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到5mL塑料离心管中!b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106悬浮细胞中加入0!8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解!然后把裂解液转移到5mL塑料离心管中!如果是fibroblasts或carcinoma细胞,0!
每个管中加入5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀!分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液).加0。7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液。10!加0!3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液!
柱式DNA提取试剂
它具有下列特点:DNA更加纯净,大多数DNA样品的OD260/280值在8-9之间!DNA产率一般在200ug/g左右(跟组织种类密切相关)!可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应!操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约10分钟,适合大规模样品处理.安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味!质量和国外同类产品相当,但价格更便宜!常温运输和保存、有效期一年!注意:溶液A容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀!

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每个管中加入5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀!分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液).加0。7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液.10.加0!3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
加入0!4mL预热的溶液B到裂解液中.由于溶液B十分粘稠,可将1mL枪头剪掉一截再用,也可以用称量方法加0!4g。加入溶液B后需要颠倒数次充分混匀.65℃水浴5-10分钟。如果室温放置,DNA产量将降低10-20%!加入0。2mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒,此时溶液将呈乳白色!一定要确保离心管底的液体被震荡起来!12000-15000g室温离心2分钟!上清透明,中间层为白膜(蛋白层).小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜!
112000-15000g室温再离心半分钟!此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA!1室温放置半分钟使残留乙醇挥发。1将离心吸附柱转移到一新的5mL塑料离心管中,加入50-100uLDNA洗脱液0,室温放置离心吸附柱1-2分钟.112000-15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用!动物DNA提取试剂盒(吸附柱法)对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜或冷冻组织的处理.