(建议)制备死细菌!若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌。死细菌的后续操作同活细菌!AnnexinV-PE偶联物YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)细菌活力/毒性检测试剂盒细菌活力/毒性检测试剂盒YF488Click-iTEdU成像试剂盒(绿色荧光)两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献)!
非LED灯(如卤素灯)可能会加热您的样本并对分析产生负面影响,照射时需要使用冰块对样品降温处理!样本可以在光解后冷冻保存。若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本,建议先进行预实验.PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA;因此,在提取基因组DNA时,需使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理.阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA!
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该修饰过程会使DNA不溶,并使其在随后的基因组DNA提取过程中与细胞碎片一起丢失,进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增!残留在溶液中未结合的PMA,在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物,使羟胺不再能够共价结合DNA,从而不影响PCR扩增。这个特性使得PMA可以通过实时定量PCR(qPCR)的手段,检测多种样本类型包括:细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞;与qPCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术相结合,广泛应用在食品和水安全和环境测试中。
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将PMA处理的样本室温置于摇床上,避光孵育10min,使染料与样本充分混匀!将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,照射时间需自行摸索!例如,可用60W的蓝光灯,照射15min。注:①若使用卤素灯,我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上.冰块应放在透明托盘中,调整光源使其直接指向样品,光解5-15min;②若直接用环境中获取的细菌进行实验,由于环境样本的复杂性或浑浊度,需适当延长光解时间!
(建议)制备死细菌!若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌!死细菌的后续操作同活细菌!两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献).将PMA处理的样本室温置于摇床上,避光孵育10min,使染料与样本充分混匀!将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,照射时间需自行摸索。