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例如,可用60W的蓝光灯,照射15min!通常,光线越亮,效率越高!非LED灯(如卤素灯)可能会加热样品对测定产生负面影响,照射时需要对样品降温处理;5,000g,10min离心样品;10!使用标准方法或试剂盒抽提基因组DNA,用于后续的qPCR实验;1进行qPCR实验,样品中被PMA修饰的DNA将会在qPCR反应中表现出扩增延迟效应;注:标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定条件!以上方法仅供参考.
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产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料,该染料本身具有微弱的荧光,但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光!它尤其与双链DNA具有高亲和性!PMA不能透过细胞膜,因此只能选择性标记死细胞上暴露在外的DNA。这个特性使得PMA可以通过实时定量PCR(qPCR)的手段,广泛用于可被培养的病原细胞的筛选,因为PMA可与死细胞上的DNA牢固结合,而不能用于PCR反应的扩增(图1)。图PMA修饰DNA后通过qPCR定量活菌和死菌的原理使用方法用合适的培养基接种、扩增细菌(扩增体积按具体实验要求而定);37℃,200rpm,过夜震荡培养;继续培养细菌,直至其培养悬液OD600值接近1;58℃3h或者90℃5min,灭活细菌,制备死菌对照样品;吸取500μL等分细菌培养液置于干净微量离心管中;向装有细菌悬液的微量离心管中加入适量PMA,使其终浓度为50μM;室温避光孵育5min,孵育期间可以适当指拨混匀,也可以盖上铝箔纸置于摇床孵育;将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,不同的光源照射时间需自行摸索,使PMA与DNA充分交联!
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