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　　在去除过量试剂并测定每种蛋白质浓度后，将过量3倍的HRP–TCO以5mg/mL、4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL和1mg/mL。60分钟后，通过SDS–PAGE分析每个偶联反应的等分试样（1µL）.货号名称CAS号A133DBCO–NHSEsterCAS1353016-71-3A102DBCO–C6–NHSEsterCAS1384870-47-6A102PDBCO–PEG5–NHSEsterCAS1378531-80-61400SulfoDBCO–TFPEster1260DBCO–PEG5–TFPEsterA124DBCO–Sulfo–NHSEsterCAS1400191-52-71259DBCO–STPEster1230SulfoDBCO–Maleimide1023MethyltetrazineDBCOA105DBCO–PEG4–BiotinCAS1255942-07-4A116WSDBCO–BiotinCAS1363444-70-5A118DBCO–mPEG5kDaA119DBCO–mPEG10kDaA120DBCO–mPEG20kDaA121DBCO–mPEG30kDa1310AFDye405DBCO1274AFDye430DBCO1278AFDye488DBCO1282AFDye532DBCO1286AFDye546DBCO1290AFDye555DBCO1294AFDye568DBCO1298AFDye594DBCO1302AFDye647DBCOA127DBCOCarboxyrhodamine110A131DBCOTAMRAA140DBCOCy3A130DBCOCy51046DBCOCy51047DBCOCy71190MBTM488DBCO1174MBTM543DBCO1184MBTM594DBCOTA102Alkyne–PEG4–Acid1080PropargylAcidTA103Alkyne–PEG4–NHSEsterTA111Propargyl–NHSEster1162PCAlkyne–NHSEster产品：TCO四嗪配体的试剂DBCO试剂无铜点击化学点击化学叠氮化物/炔烃试剂含氟叠氮化物探针下一代叠氮化物探针代谢标记试剂可切割点击化学生物素探针无生物素/链霉亲和素富集试剂盒和培养基TCO四嗪配体TCO试剂四嗪选择指南四嗪试剂荧光四嗪DBCO试剂标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂炔烃标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂叠氮化物标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂荧光叠氮化物探针34荧光吡啶叠氮化物三功能点击化学生物素探针可切割点击化学生物素探针DADPS生物素探针光可切割生物素探针Dde生物素探针双偶氮生物素探针单击化学辅助试剂代谢标记试剂富集培养基和试剂盒不可裂解的富集试剂盒可裂解的浓缩试剂盒和培养基点击功能化琼脂术语生物正交化学是指在生物系统中发现的其他丰富化学官能团存在的情况下，在不与天然生物化学过程相互作用或干扰的情况下发生的任何化学反应。

　　反应性显然是在高稀释条件下进行应用的先决条件，例如蛋白质-蛋白质偶联。蛋白质-蛋白质偶联通常被限制在低蛋白质浓度（例如。1mg/mL）.反应性可以由生物正交反应物对的二阶速率常数来定义。产物形成的二阶速率常数越高，在合理的时间尺度内，在接近中性的pH下，在低反应物浓度下，在不必使用大量过量的任一生物分子的情况下，偶联就越有效。生物正交反应物在10µM下的二阶速率常数（M–1s–1）与随时间变化的共轭产率百分比之间的关系如图5所示。

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　　COA提供了所使用的测试方法、结果和产品的纯度水平!货号名称CAS号1016TCO–NHSEster1192TCO–PNBEsterCAS1438415-89-4A137TCO–PEG4–NHSEsterCAS1621096-79-41398TCO–PEG4–TFPEster1088TCO–PEG4–Acid1355SulfoTCO–Maleimdie1021TCO–Amine,HClsaltCAS1609659-02-01188TCO–PEG3–Amine1356AFDye488TCO1358AFDye568TCO1089Cy5TCO1124TetrazineAcidCAS1380500-92-41125MethyltetrazineAcidCAS1380500-88-81073Methyltetrazine–PEG4–AcidCAS1802907-91-01128Methyltetrazine–NHSEsterCAS1644644-96-11127Tetrazine–NHSEster1193Methyltetrazine–Sulfo–NHSEster1191Tetrazine–Sulfo–NHSEster1069Methyltetrazine–PEG4–NHSEsterCAS1802907-92-11399Methyltetrazine–PEG4–STPEster1143Tetrazine–PEG5–NHSEsterCAS1682653-80-01068Methyltetrazine–PEG4–Maleimide1011MethyltetrazineAmine,HClsaltCAS1092689-33-21130toolTetrazineAmine,HClsaltCAS1092689-33-21012Methyltetrazine–PEG4–Amine,HClsaltCAS1802908-05-91013Methyltetrazine–PEG4–Alkyne1022MethyltetrazineDBCO1014Methyltetrazine–PEG4–Azide1361AFDye488Tetrazine1357AFDye555Tetrazine1364AFDye594Tetrazine1189Cy5Tetrazine1027Cy7Methyltetrazine1117DBCOAcidCAS1353016-70-2A101DBCO–C6–Acid1CAS425485-72-8A101PDBCO–PEG5–AcidCu–自由点击化学（SPAAC）•生物相容性反应发生在温和的水性缓冲条件下•不需要催化剂或辅助试剂•生物正交对（DBCO/叠氮化物）表现出长期水稳定性•市面上有多种叠氮化物和环辛烯（如DBCO）•动力学对于相对高浓度的应用（例如，蛋白质-小分子缀合、蛋白质-肽缀合）足够快逆需求Diels-Alder反应•极快的动力学（800M–1s–1）允许在60分钟或更短时间内以1mg/mL的速度进行有效的蛋白质-蛋白质结合•生物相容性反应发生在环境温度下温和的水性缓冲条件下•不需要有毒催化剂或辅助试剂•四嗪和TCO改性的生物聚合物在水性储存中保持活性（在4°C下储存数周）•四嗪类药物和TCO不易获得，但可在市场上买到!

　　这一重要特征经常被忽视，然而，缺乏选择性是通过不必要和非选择性的分子内相互作用进行自共轭（同源二聚体形成）的驱动力!最后，重要的是化学反应性官能团具有生物相容性！连接反应在与生物分子相容的温和水性缓冲条件下进行是至关重要的，而不需要对生物系统具有高毒性的催化试剂（例如Cu（I））!生物正交化学官能团必须在长期水储存期间保持高度反应性但稳定，同时对高浓度的其他生物官能团保持惰性!不幸的是，只有少数化学转化符合这些严格定义的条件：反应性、选择性和生物相容性.

　　生物正交激活的组分仅相互特异性和自发地反应，形成所需的缀合物。这种生物正交连接策略如图1所示为了使化学反应性官能团适合生物偶联，三个基本特征是非常重要的：反应性、化学选择性和生物相容性.第*个反应性显然是在高稀释条件下进行应用的先决条件，例如蛋白质-蛋白质偶联！由于蛋白质的可用性有限和/或相关的成本因素，蛋白质-蛋白质偶联通常被限制在低蛋白质浓度（例如1mg/mL）！反应性可以由生物正交反应物对的二阶速率常数来定义。