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  • 更新日期:2020-04-11
产品说明

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全自动活细胞成像系统现货_EVOS FL Auto全自动活厂家-北京科誉兴业科技发展有限公司
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3. 低丰度及稀有序列的精确定量:目前对于低丰度目标序列的检测,定量PCR、杂交等方法都因受到背景DNA的干扰,使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下,其重复性就不是很高),而微滴式数字PCR系统通过核心的微滴化处理,使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来,QX200微滴式数字PCR仪,伯乐QX200微滴式,从而提高了检测的灵敏度及精确性 QX200微滴式数字PCR仪更多推荐
RT-PCR与PCR的区?
RT-PCR 为反转录PCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。实时PCR(real-time PCR),属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。real time PCR 的定量使用荧光色素,目前有二种方法。
一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素,例如SYBR Green荧光染料;另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针(probe),如Taqman探针。两种方法原理不同。SYBR Green荧光染料游离时不发光,当反应体系中存在双链DNA时,SYBR Green与双链DNA结合,此时才发光。
Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团,找QX200微滴式数字PCR仪,数字PCR仪相关,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5"-3"外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。
real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合,能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR(quantitative RT-PCR)”RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别,无非就是在反转时候RNA的定量,不同模板的设定。
对引物没有特别的要求,能特异代表目的基因就行。real-time PCR根据原理的不同,引物选择也不同。通常用的是SYBR Green的方法,这种方法引物在RT-PCR的基础上需要注意:1。退火温度同内参;2。片段长度不要超过200;real-time PCR的引物可以跑RT-PCR,反之不一定。
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