加样（样本处理区）将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。PCR扩增（核酸扩增区）1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择：检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可！3推荐循环参数设置：结果分析判定1结果分析条件设定设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果!

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　　【标本采集】抽取全血5mL至EDTA-2Na抗凝管，或采集患者尿液、病变组织。【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。【使用方法】2核酸提取推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作！试剂配制（试剂准备区）根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；反应管数每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管。

汉坦病毒1型核酸检测试剂盒荧光PCR

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　　试剂配制（试剂准备区）根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；反应管数每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管.加样（样本处理区）将步骤提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀短暂离心。PCR扩增（核酸扩增区）将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。

　　【试剂组成】HTV-U反应液酶液HTV-U阳性质控品（1×10^6拷贝/ml）阴性质控品注：1）不同批号试剂不能混用。2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数！【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月！【适用仪器】ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪!

　　推荐循环参数设置：结果分析判定结果分析条件设定设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果.检测方法的局限性样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段!