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获得患者样本后,需尽快进行检测,如无法立即检测需要转运的样本,应按照说明书的要求进行低温封装,并送到专门的检测机构进行检测!检测机构收到样本后,对样本进行核酸提取,核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒!病毒RNA需要首先逆转录为cDNA,再进行扩增检测.PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪,通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小,可以判断患者样本中是否含有新型病毒。
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核酸检测技术
所有生物都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物.新型病毒出现后,我国科学家在极短的时间里完成了对新型病毒全基因组序列的解析,并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型病毒中的特异核酸序列。临床实验室检测过程中,如果能在患者样本中检测到新型病毒的特异核酸序列,应提示该患者可能被新型病毒感染.
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检测新型病毒特异序列的方法常见的是荧光定量PCR(聚合酶链式反应).因PCR反应模板仅为DNA,因此在进行PCR反应前,应将新型病毒核酸(RNA)逆转录为DNA。在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团!探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。
但无论是抗体检测还是核酸检测,都存在一定比例的假阳性和假阴性,所以,临床医生需要根据临床症状和流行病学调查结果综合进行判断.有什么用途?病毒感染人体之后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖,因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒.在感染一段时间以后,一般是7至10天后,人体会产生针对病毒的特异性抗体.先出现的是IgM抗体,随后会出现IgG抗体,所以使用免疫学检测方法能够检测这些特异性抗体,判断人体是否感染过病毒!
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有什么区别?核酸阳性说明标本中存在病毒核酸,意味着感染者可能具有传染性!IgM抗体阳性,说明患者处于感染早期,IgG抗体阳性说明感染过病毒,但不能确定其是否具有传染性.如康复者,一般检测IgG抗体阳性,如果核酸检测阴性,间隔24小时再测核酸仍然是阴性,那提示其不具有传染性!对于新型病毒的核酸检测,首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集,常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等!
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