检测样品Ct值≥40,则判定为被检样品阴性,未检出过敏原大豆成分!检测样品35<Ct值<40,则重复一次!如再次扩增后Ct值仍为<40,则判定为被检样品阳性,检出过敏原大豆成分!如再次扩增后Ct值≥40,则判定为被检样品阴性,未检出过敏原大豆成分.★NG反应为平滑直线,PG反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效!如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系.大豆源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)◆注意事项本试剂检测灵敏度高.
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◆自备耗材和仪器①冰盒;②移液器(0!5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属浴。◆样品处理参照《SN/T19619-2013出口食品过敏原成分检测第-19部分:实时荧光PCR方法检测大豆成分》或其他标准处理样品,制备的样本保存待用。称取约200g样品,用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状用以提取DNA!样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应经160℃干烤2h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用1%次氯酸钠溶液浸泡。
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盖好配套的PCR管盖后,涡旋混匀30s,离心1min,立即进行PCR扩增反应.扩增反应(扩增及产物分析区)使用荧光定量PCR仪,荧光基团选择FAM,淬灭基团选择NONE。按下列条件设置扩增反应:基线和阈值设定基线范围选择一般在6-15个循环,如果有强阳性样本,应根据实际情况调整基线范围.阈值线应超过空白对照扩增曲线的Z高点,且Ct值不出现任何数值!◆结果判定检测样品Ct值≤35,则判定为被检样品阳性,检出过敏原大豆成分!
不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。◆样品处理参照《SN/T19619-2013出口食品过敏原成分检测第-19部分:实时荧光PCR方法检测大豆成分》或其他标准处理样品,制备的样本保存待用!称取约200g样品,用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状用以提取DNA!样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应经160℃干烤2h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用1%次氯酸钠溶液浸泡.
其它防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的规定执行。详细步骤请按照标准操作。◆实验操作模板制备(样本制备区)建议使用植物基因组提取试剂盒或深加工食品DNA提取试剂盒等商品化试剂盒,具体过程详见产品说明书!添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管,放置在室温待解冻后,离心30秒后揭开封口膜,向每管反应液中分别加入5μL模板,顺序为NG、待测样品模板、PG-大豆源-P!
★分区之间Z好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染!实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖!
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