第二个就是把样本全部收集好了后，再一次进行实验，用同一批次试剂盒!这个可以减少批间差，但样本不同时间取样会导致前后样本数值之间会存在一定的差异性!这个还是要根据实际取样周期和取样量来做决定.小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒96T使用说明书本试剂盒仅供研究使用！检测范围：使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素-6（IL-6）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-6（IL-6）水平!

　　TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色!颜色的深浅和样品中的白细胞介素-6（IL-6）呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-6（IL-6）浓度！标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验!若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性.

　　血清血浆的收集如下：1，促凝管（临床上用橘红色管头）待分层后取上清液保存2，自然凝固，取普通生化试管，自然凝固30分钟以上，然后离心取上清，离心转速为2000转每分，时间15分钟。全血收集完成后尽量分离出血红细胞，避免导致溶血对实验产生干扰其次涉及样本保存，因为不确定老师样本取样周期和实验周期到底有多长，这个过程涉及以下问题。1，如果取样周期比较久，而且每次样本不是很多，每天或者短时间都有样本出来，这个情况样本涉及到保存.

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　　标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性！操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）!

　　加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀！温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟！配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外！温育：操作同洗涤：操作同5！显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

　　注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存！2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果!3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间Z好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第-一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）!