加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外!温育：操作同洗涤：操作同5!显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。10。终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。1测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）!测定应在加终止液后15分钟以内进行.操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量!实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。

　　TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关！用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度.小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒小鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒小鼠白介素11(IL-11)ELISA试剂盒小鼠白介素15(IL-15)ELISA试剂盒小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒小鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒小鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒小鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒小鼠白介素9(IL-9)ELISA试剂盒小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒小鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA试剂盒小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒96T使用说明书本试剂盒仅供研究使用！

　　操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔!在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品稀释度为5倍）！加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀!温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.

兔肿瘤坏死因子αELISA检测试剂盒

　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果！3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差!一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样！4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔.如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请乘以总稀释倍数（×n×5）！5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染.

　　6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准！8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用!小鼠骨退化特异标志物(CTX-2)ELISA试剂盒小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA试剂盒小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA试剂盒小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA试剂盒!