它具有下列特点:DNA更加纯净,大多数DNA样品的OD260/280值在8-9之间!DNA产率一般在200ug/g左右(跟组织种类密切相关)。可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应!操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约10分钟,适合大规模样品处理。安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。质量和国外同类产品相当,但价格更便宜.常温运输和保存、有效期一年.注意:溶液A容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀.
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每个管中加入5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀!分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液)。加0。7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液!10!加0!3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
提取试剂盒50T_动物DNA提取试剂盒吸附柱法_上海晅科生物科技有限公司
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8mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞!c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加0!8mL预热的溶液A,用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到5mL塑料离心管中.对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg!对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜或冷冻组织的处理.
植物DNA提取
上海晅科生物科技有限公司在其他生物制品这个行业中,是一家屈指可数的好公司。其主营的产品——动物DNA提取试剂盒(吸附柱法),更是在业界中受到广大客户的喜爱。
112000-15000g室温再离心半分钟!此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA.1室温放置半分钟使残留乙醇挥发!1将离心吸附柱转移到一新的5mL塑料离心管中,加入50-100uLDNA洗脱液0,室温放置离心吸附柱1-2分钟!112000-15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。动物DNA提取试剂盒(吸附柱法)对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜或冷冻组织的处理!
每个管中加入5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀!分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液)!加0!7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液.10。加0!3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
1 淋巴细胞的分离(1)取抗凝血5ml,1000~1200r/min离心10min。(2)吸取上层血浆转至新的小管子中,-70℃保存。(3)以等体积的PBS稀释血细胞后加入至4ml淋巴细胞分离液中。(4)室温条件下离心1000~1200r/min25min,吸取中间层白细胞转移到干净离心管中。
(5)加入10ml PBS,混匀,离心,1000~1200r/min,共10min,弃掉上清。重复2次。(6)用1。5ml PBS悬浮白细胞,在4℃条件下,5000rpm10min,放弃上清,沉淀-70℃保存。2 DNA的常规提取白细胞用15ml DNA抽提液悬浮,37℃保温1h,然后按照常规的DNA提取的方法进行提取。
这种DNA的提取方法分淋巴细胞的分离和DNA提取两个步骤。相对而言,耗时多,操作复杂,消费的试剂也较昂贵。3 改进的方法在日常的外周血的收集过程中,我们利用下面的方法 本课题受辽宁省教委科技攻关项目(编号 8)提取DNA:(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS,混匀,离心2000r/min10min。
2000r/min离心10min。(2)将血浆转至新的试管中,-70℃保存。(3)将血细胞转入另一支大的试管中(10ml或50ml)加入尽可能多的冷的蒸馏水混匀。(4)将其插入冰内5~10min或放入-20℃15min。(5)将上述混合液从冰中或-20℃取出放至室温,离心2000r/min20min。
(6)弃上清,收集沉淀。(7)在沉淀中加入15ml PBS,混匀,离心2000r/min10min。此步骤重复3次至沉淀为淡红色或白色。(8)将沉淀转入小管,加少量PBS,每分钟5000r/min离心5min,去上清。(9)沉淀-70℃保存。
通过比较我们会发现这种方法不用进行淋巴细胞的分离,直接提取DNA,不仅节省了实验时间,而且节省了淋巴细胞分离液、蛋白酶K和RNase等多种试剂,更重要的是DNA的质量完全可以满足PCR的要求,是一种简便快捷的实验方法。 参考文献1 卢圣栋。
现代分子生物学实验技术,第2版。北京:中国协和医科大学出版社,1999。2 Zhang J,Zheng S,Gao Y,et al。Apartial allelotyping of urothelial carcinoma of bladder in the Chinese。
Carcinogenesis,2003,6:58。3 Zhang J,Fan Z,Gao Y,et al。Detecting bladder cancer in the Chinese by microsatellite analysis:ethnic and etiologic considerations。
J Natl Cancer Inst,2001,Jan3:93(1):45-50。 作者单位:116027大连医科大学组织学与胚胎学教研室 116000大连医科大学*附属医院胸外科。