建议稀释的几组基因组浓度在qPCR分析体系的范围内!以Ct值为纵坐标，细胞数为横坐标，制作标准曲线!计算实验样本的拷贝数：Ct=斜率*细胞数+y轴截距（y=mx+b）细菌数样本=（Ct–y轴截距）/斜率注：☆纯化过程中活细菌DNA未损失！示例：E.coli（uidA）图活/死大肠杆菌用25μMPMA孵育，然后光解。后提取gDNA，用uidA引物进行扩增.注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验.

　　一般来说，灯越亮，光解步骤的效率就越高！非LED灯（如卤素灯）可能会加热您的样本并对分析产生负面影响，照射时需要使用冰块对样品降温处理!样本可以在光解后冷冻保存！若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本，建议先进行预实验!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA；因此，在提取基因组DNA时，需使用相同体积的基因组DNA洗脱液，进行体积归一化处理!

　　YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（橙红色荧光）YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（橙红色荧光）YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（橙红色荧光）YF555Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（橙红色荧光）YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）YF594Click-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（远红荧光）YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（远红荧光）YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（远红荧光）YF647AClick-iTEdU通用款细胞增殖检测试剂盒（远红荧光）EDU（5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）EDU（5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）EDU（5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）CFDASE细胞增殖与示踪检测试剂盒CFDASE细胞增殖与示踪检测试剂盒DiO（细胞膜绿色荧光探针）DiA（细胞膜绿色荧光探针）DiI（细胞膜橙红色荧光探针）产品说明书PMA（叠氮溴化丙锭）,20mMinwater产品货号：XK4051产品规格：100μL产品参数外观：橙红色液体Ex(pH3)=464nm(beforephotolysis)Ex/Em(afterphotocrosslinkingtonucleicacid)=510/610nm分子式：C27H32Cl2N6分子量：515储存条件-20℃避光保存，有效期见外包装。

　　产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料，该染料本身具有微弱的荧光，但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光!它尤其与双链DNA具有高亲和性！PMA不具有细胞膜渗透性，因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA.PMA修饰的DNA经蓝光（~464nm）光解后，PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基，与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键，从而导致永，久性DNA修饰（图1）！

我们推荐PMA标准液品牌

　　阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA!为了验证PMA在测试样本中的有效性，可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化！实验材料（自备）光源（用于PMA修饰DNA后的光解步骤）细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基，在细菌培养箱中培养过夜或更长时间，使细菌培养至对数生长期（OD600≈0)；注：培养基类型及培养时间根据实验调整。

PMA标准液品牌

　　将样品曝光，可以使用蓝色或白色光源，照射时间需自行摸索。例如，可用60W的蓝光灯，照射15min。注：①若使用卤素灯，我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上.冰块应放在透明托盘中，调整光源使其直接指向样品，光解5-15min；②若直接用环境中获取的细菌进行实验，由于环境样本的复杂性或浑浊度，需适当延长光解时间。注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验.试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光!

正宗PMA标准液品牌

　　为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。死细菌的dCt取决于许多因素，包括：菌株系/细胞类型；细菌被杀死方式；PMA使用浓度；扩增序列长度!活细菌占比计算如果死、活细菌对照结果正常，可以进入样本中活细菌占比计算!计算样本的dCt值：转换dCt值为活细菌比例：计算活细菌的绝，对数量dCt样本=Ct(样本,PMA处理)-Ct(样本,PMA未处理)PMA抑制倍数=2（样本dCt）活细菌%=100/PMA抑制倍数如果想计算样本中活细菌的绝，对数量☆，需要用已知数量的目标菌的基因组DNA制作标准曲线。