产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料，该染料本身具有微弱的荧光，但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光.它尤其与双链DNA具有高亲和性！PMA不具有细胞膜渗透性，因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA！PMA修饰的DNA经蓝光（~464nm）光解后，PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基，与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键，从而导致永，久性DNA修饰（图1）。

　　注：①商用DNA提取试剂盒提取的DNA，qPCR模板以2μL作为起始优化体积；②模板体积不得超过最终反应体积的10%；③模板浓度：gDNA做模板时，通常1-10ng即可；④PCR引物的终浓度通常为0!4μM，可以得到较好的结果，反应性能较差时，可以在0!2-1μM范围内调整引物浓度。轻轻涡旋混匀反应混合液，转移固定体积至PCR管.测试程序（根据自备qPCRMix试剂盒程序进行程序设定）！数据分析使用活细菌和死细菌作为对照，分析计算样本中活细胞数。

　　建议开始PMAqPCR活细菌检测前，先验证引物及PCR程序是否合适.死、活细菌对照dCt计算qPCR结束后，使用仪器软件计算每个样本的Ct值.通过计算每个对照细菌的dCt的方式，判断PMA是否成功抑制了死细菌DNA的扩增，计算如下：dCt活=Ct(活,PMA处理)-Ct(活,PMA未处理)dCt死=Ct(死,PMA处理)-Ct(死,PMA未处理)活细菌的dCt期望值接近于0±1，这表明PMA不会影响活细胞DNA的扩增；死细菌的dCt期望值大于4（dCt为4表示减少了约16倍，即去除了94%的死细菌DNA；dCt为8表示减少了约250倍，即去除了96%的死细菌DNA）!

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　　将样品曝光，可以使用蓝色或白色光源，照射时间需自行摸索!例如，可用60W的蓝光灯，照射15min.注：①若使用卤素灯，我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上。冰块应放在透明托盘中，调整光源使其直接指向样品，光解5-15min；②若直接用环境中获取的细菌进行实验，由于环境样本的复杂性或浑浊度，需适当延长光解时间.注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验.试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光.

　　阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA。为了验证PMA在测试样本中的有效性，可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化.实验材料（自备）光源（用于PMA修饰DNA后的光解步骤）细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基，在细菌培养箱中培养过夜或更长时间，使细菌培养至对数生长期（OD600≈0)；注：培养基类型及培养时间根据实验调整。

　　试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光!为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作!DilinoleylDiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiD（细胞膜红色荧光探针）DiR（细胞膜近红外荧光探针）CytoMBriteTM细胞膜红色荧光探针CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiOPlus（细胞膜绿色荧光探针升级款）CytoMBriteTM细胞膜橙红色荧光探针Hoechst33258Hoechst33258染色液（即用型）Hoechst33342Hoechst33342染色液（即用型）DAPI（4,6-二脒基-2-苯，基吲哚二盐酸盐）DAPI染色液（即用型）PropidiumIodide（碘化丙锭，PI）EthidiumHomodimer-I（溴乙啡锭二聚体I，EthD-I）DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料7-AADOxazoleyellow（恶唑黄）,1mMinDMSOCalceinAM（钙黄绿素AM）LuciferYellowCada，verine!

　　建议稀释的几组基因组浓度在qPCR分析体系的范围内!以Ct值为纵坐标，细胞数为横坐标，制作标准曲线.计算实验样本的拷贝数：Ct=斜率*细胞数+y轴截距（y=mx+b）细菌数样本=（Ct–y轴截距）/斜率注：☆纯化过程中活细菌DNA未损失。示例：E!coli（uidA）图活/死大肠杆菌用25μMPMA孵育，然后光解。后提取gDNA，用uidA引物进行扩增。注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验! 大功率激光器是工业激光设备的核心部件，近几年来我国在这一领域的技术、工艺水平有了长足的进步，但与美、日、欧盟等发达国家相比我国的大功率激光器的制造水平和应用规模还有很大差距，大量高端大功率激光器件与激光加工成套设备依赖进口，其中一个重要原因是我国的大功率激光器仍然属于研制或小规模生产，没有实现产品标准化，难以提高产品的档次和质量，也限制了产品的发展规模。国家标准大功率激光器应用分技术委员会的成立，将改变这一现状。下一步，委员会将在对国内和国际大功率激光器应用加工设备相关标准进行对比、分析的基础上，编制大功率激光器应用分技术委员会标准体系框架，制订本专业激光器应用和安全辐射等基础标准。