建议稀释的几组基因组浓度在qPCR分析体系的范围内.以Ct值为纵坐标，细胞数为横坐标，制作标准曲线.计算实验样本的拷贝数：Ct=斜率*细胞数+y轴截距（y=mx+b）细菌数样本=（Ct–y轴截距）/斜率注：☆纯化过程中活细菌DNA未损失!示例：E。coli（uidA）图活/死大肠杆菌用25μMPMA孵育，然后光解.后提取gDNA，用uidA引物进行扩增。注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验！

　　图PMA修饰DNA后通过qPCR定量活菌和死菌的原理使用方法使用前注意事项PMA根据细胞膜通透性区分死菌和活菌！许多杀死细菌的方法，会导致细胞膜受损，因此适用于PMA检测！但有些方法，如紫外线照射，可能不会立即导致细胞膜破裂.因此，在选择PMA检测之前，需先进行文献检索和预实验确定是否适用于您选择的细菌类型和杀伤方法！PMA处理完细菌后需要进行光解，以使染料与死细胞DNA共价结合!光解操作可以使用蓝色或白色光源!

染细胞PMA标准液

　　试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光！为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作!DilinoleylDiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiD（细胞膜红色荧光探针）DiR（细胞膜近红外荧光探针）CytoMBriteTM细胞膜红色荧光探针CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiOPlus（细胞膜绿色荧光探针升级款）CytoMBriteTM细胞膜橙红色荧光探针Hoechst33258Hoechst33258染色液（即用型）Hoechst33342Hoechst33342染色液（即用型）DAPI（4,6-二脒基-2-苯，基吲哚二盐酸盐）DAPI染色液（即用型）PropidiumIodide（碘化丙锭，PI）EthidiumHomodimer-I（溴乙啡锭二聚体I，EthD-I）DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料7-AADOxazoleyellow（恶唑黄）,1mMinDMSOCalceinAM（钙黄绿素AM）LuciferYellowCada，verine!

高品质染细胞PMA标准液

　　注：①商用DNA提取试剂盒提取的DNA，qPCR模板以2μL作为起始优化体积；②模板体积不得超过最终反应体积的10%；③模板浓度：gDNA做模板时，通常1-10ng即可；④PCR引物的终浓度通常为0!4μM，可以得到较好的结果，反应性能较差时，可以在0!2-1μM范围内调整引物浓度!轻轻涡旋混匀反应混合液，转移固定体积至PCR管!测试程序（根据自备qPCRMix试剂盒程序进行程序设定）!数据分析使用活细菌和死细菌作为对照，分析计算样本中活细胞数.

　　产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料，该染料本身具有微弱的荧光，但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光！它尤其与双链DNA具有高亲和性。PMA不具有细胞膜渗透性，因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA。PMA修饰的DNA经蓝光（~464nm）光解后，PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基，与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键，从而导致永，久性DNA修饰（图1）！