推荐循环参数设置：结果分析判定结果分析条件设定设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果.检测方法的局限性样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段!

　　加样（样本处理区）将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心!PCR扩增（核酸扩增区）1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择：检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可！3推荐循环参数设置：结果分析判定1结果分析条件设定设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果！

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　　【检验原理】本试剂盒对汉坦病毒基因组保守区设计特异性的引物和探针，用一步法荧光RT-PCR技术对汉坦病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断！【试剂组成】注：1）不同批号试剂不能混用.2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。【适用仪器】ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪！

　　结果判断阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；可疑：检测通道35Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；阴性：样本检测结果Ct值38或无Ct值!质控标准阴性质控品：Ct38或无Ct值显示；阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；以上条件应同时满足，否则实验视为无效！汉坦病毒通用型（HTV-U）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）【产品名称】商品名称：汉坦病毒通用型（HTV-U）核酸检测试剂盒(荧光PCR法)Name：Hanta-virusDetectionKit(Real-TimePCRMethod)【包装规格】50T/盒【预期用途】本试剂盒适用于检测病患血液、尿液及病变组织中的汉坦病毒RNA，适用于汉坦病毒感染的辅助诊断。

　　试剂配制（试剂准备区）根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；反应管数每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管！加样（样本处理区）将步骤提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀短暂离心。PCR扩增（核酸扩增区）将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可.

　　【试剂组成】HTV-U反应液酶液HTV-U阳性质控品（1×10^6拷贝/ml）阴性质控品注：1）不同批号试剂不能混用!2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数.【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。【适用仪器】ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

　　2结果判断阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；可疑：检测通道35Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；阴性：样本检测结果Ct值38或无Ct值！质控标准阴性质控品：Ct38或无Ct值显示；阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；以上条件应同时满足，否则实验视为无效.【注意事项】所有操作严格按照说明书进行；试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；反应液应避光保存；反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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